Exemple de protocole de préparation d'échantillons de plantes en vue de leur examen au MEB Toutes les étapes se déroulent à la t° du laboratoire ● 1 ère fixation: glutaraldéhyde 2. 5% dans tampon cacodylate de sodium 0. 1M (pH 7. 0) – 2h ● Lavages: dans tampon cacodylate de sodium 4 x 15 min ● 2 ème fixation: OsO4 1% dans tampon cacodylate de sodium 2 heures ● Lavages: Cacodylate de sodium 2 x 15 minutes puis Eau milliQ 2 x 15 minutes ● Déshydratation dans l'éthanol:
Ethanol 30 20 min Ethanol 50 20 min Ethanol 70 20 min Ethanol 90 20 min Ethanol 100 3 x 20 min
● Point critique ● Métallisation: dépôt d'une couche d'or avec l'appareil « JEOL 1200 - Fine coater » de la plateforme de bioimagerie, Bioimaging Center de la Faculté des Sciences - Université de Genève. ● Observations: microscope Jeol JSM-6510 LV - Protocole d'utilisation - rédigé en collaboration avec Stéphane Hagmann (auxiliaire de recherche de mai à août 2011). Microphotographies d'organes de diverses plantes vues avec le MEB JEOL JSM 6510LV
Prises de vue: Stéphane Hagmann (auxiliaire de recherche et de l'enseignement), Kilian Anderegg (apprenti laborant); Michèle Crèvecoeur; Annotations & commentaires des images: Michèle Crèvecoeur
II. 32) porte le
nom de tripode à cause des trois vis micrométriques avec lesquelles il est possible de régler
l'inclinaison de l'échantillon. Fig. 32: Tripode (a) vue latérale; (b) vue en dessus [Aya07]. Pour obtenir une vue transverse de la couche, il est nécessaire dans un premier temps
de réaliser un sandwich à partir de l'échantillon à étudier (figure II. 33 (a)). L'échantillon est
coupé en morceaux de 3x0, 5 mm 2 qui l'on colle face à face pour former le sandwich. Ultérieurement le sandwich est morcelé en tranches de 300 µm (figure II. Ensuite, les
tranches sont polies en deux étapes: un polissage plan d'une des facettes suivi d'un polissage
légèrement incliné de l'autre facette pour l'obtention d'un biseau (figure II. 33 (b)). Pour le
polissage, l'échantillon est collé sur le support en verre de la tripode avec de la colle
cyanoacrylate de manière à pouvoir récupérer la lame par immersion dans un bain d'acétone. Fig. 33: Schémas: (a) du sandwich de l'échantillon; (b) de l'extrémité biseautée préparée
par polissage.
3, Principe de la rupture. 119|2. 1, Techniques impliquant une fracture: broyage, coin clivé, ultramicrotomie, cryo-ultramicrotomie, cryo-fracture. 121|3, Action chimique. 121|3. 1, Principe de la dissolution chimique et électrochimique. 123|3. 1. 1, Techniques impliquant une dissolution chimique et électrochimique. 125|4, Action ionique. 125|4. 1, Principe de l'abrasion ionique. 127|4. 2, Techniques impliquant une abrasion ionique: bombardement ionique, amincissement par faisceau d'ions focalisés FIB. 130|5, Action conduisant à un changement d'étatdes matériaux contenant une phase aqueuse. 130|5. 1, Élimination de la phase aqueuse. 132|5. 2, Principe de In congélation. 135|5. 3, Principe de la substitution, imprégnation et enrobage en mode cryogénique. 136|5. 4, Principe de la cryo-sublimation. 137|6, Action conduisant à un changement des propriétés du matériau. 137|6. 1, Principe de la fixation chimique. 143|6. 2, Principe de la déshydratation. 3, Principe de l'imprégnation. 146|6. 4, Principe de l'enrobage ou de l'inclusion.
Préparation MEB – Microscopie électronique et analytique
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